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半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)是Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ（蛋白質(zhì)免疫印跡）中用于將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜（如ＰＶＤＦ或ＮＣ膜）的關(guān)鍵組件。與傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)相比，半干轉(zhuǎn)印系統(tǒng)具有操作簡便、轉(zhuǎn)印時間短、試劑消耗少等優(yōu)勢。

１．　系統(tǒng)組成與工作原理

（１）核心組件

組件功能

轉(zhuǎn)印槽（Ｔｒａｎｓｆｅｒ　Ｃｅｌｌ）容納電極板、濾紙、凝膠和膜，提供穩(wěn)定的電場環(huán)境

電極板（陽極／陰極）通常為石墨或鉑金材質(zhì)，確保電流均勻分布

緩沖液墊（Ｆｉｌｔｅｒ　Ｐａｐｅｒ　Ｐａｄｓ）浸漬轉(zhuǎn)印緩沖液，代替?zhèn)鹘y(tǒng)濕轉(zhuǎn)的液體緩沖液槽

電源模塊提供恒定電流／電壓（通常１５－２５Ｖ，轉(zhuǎn)印３０－６０分鐘）

（２）工作原理

“三明治”結(jié)構(gòu)組裝：依次疊放陽極板→緩沖液墊→凝膠→膜→緩沖液墊→陰極板。

電場驅(qū)動轉(zhuǎn)印：在電流作用下，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)從凝膠向膜（正極側(cè)）遷移。

半干環(huán)境：緩沖液僅存在于濾紙和凝膠／膜界面，無需大量液體。

２．　操作步驟（以ＰＶＤＦ膜為例）

激活膜：ＰＶＤＦ膜需甲醇浸泡１分鐘，ＮＣ膜可直接使用。

浸泡濾紙：將濾紙浸透轉(zhuǎn)印緩沖液（如Ｔｒｉｓ－Ｇｌｙｃｉｎｅ含甲醇）。

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組裝“三明治”：

陽極板（＋）

濾紙（３層）

凝膠（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ膠）

膜（緊貼凝膠無氣泡）

濾紙（３層）

陰極板（－）

轉(zhuǎn)印設(shè)置：恒定電流１－２　ｍＡ／ｃｍ2（膜面積），時間３０－６０分鐘（視蛋白大小）。

轉(zhuǎn)印后處理：膜用ＴＢＳＴ洗滌，進(jìn)行封閉和抗體孵育。

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